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植物核糖体提取试剂盒用简便快速的方法即可快速提取得到植物核糖体。本试剂盒适用于提取新鲜植物叶片样本的核糖体，用于冻存样本的提取时核糖体回收率较低。提取的核糖体具有生物活性，可以用于核糖体功能研究、核糖体蛋白提取等各种下游应用。
本试剂盒采用酶法的提取方法，回收率比非酶法稍高，但是耗时较长。需要非酶法提取试剂盒可以联系百奥莱博选择其他货号的试剂盒（相关产品HR8209），非酶法提取速度较快，可以在一小时内快速提取得到核糖体，但是回收率比酶法核糖体提取试剂盒稍低。请根据不同的需要选择试剂盒。
本试剂盒提取的得到的为真核型的核糖体，需要叶绿体线粒体等原核型核糖体提取的请选择其他货号的试剂盒。
试剂盒以外自备试剂耗材和仪器：
● Dounce匀浆器● 离心机● 涡旋混匀器● 振荡器● PBS ● 移液器● 细胞筛(100μm)

组份	50T	100T
试剂A：植物核糖体提取液A	25mL	50mL
试剂B：植物核糖体提取液B	25mL	50mL
试剂C：植物核糖体保存液C	25mL	50mL

提取液2～8℃保存；长期不用-20℃保存。有效期1年。


● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

• 取200mg～500mg新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。
  注：
  ● 也可用锋利的刀片将叶片样本切成尽可能小的小块。
  
• 加入500μL试剂A，充分混匀。
  注：
  ● 可以将叶片组织在液氮中冷冻后捣碎成细的粉末后再加入试剂A。
  
• 在30℃条件下静置15分钟。
  
• 在2000×g条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀。
  
• 在沉淀中加入0.5mL提取液B，充分混匀。
  注：
  ● 培养细胞1000×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞后用PBS洗涤2次，然后直接加入提取液B重悬。
  ● 大约每300μL细胞压积中加入1mL提取液B。
  ● 根据实际样本体积调整提取液用量，一般试剂是样本体积的2～3倍，充分淹没样本即可。
  
• 将提取液B样本悬液置振荡器37℃～45℃或室温震荡24～72小时。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，中间每隔几小时用移液器吹打混匀即可。
  ● 根据下游核糖体的应用选择合适的温度，最高温度为55℃时制备速度最快。但是温度过高会影响样本活性，请根据下游应用选择温度。
  ● 不同类型的植物样本需要处理的时间差异较大。拟南芥较易处理，鲜嫩叶片较易处理，年龄小的样本处理时间短。拟南芥嫩叶最短4小时即可。
  ● 部分细胞壁较厚的植物类型可能需要处理更长时间。可以延长至12小时以上过夜处理以提高得率。
  
• 在2000×g离心5分钟，弃上清，收集沉淀。
  注：
  ● 有条件的话最好用100μm细胞筛网过滤提取液B处理液后，收集滤液再离心。
  ● 没有细胞筛可以不过滤。
  
• 在沉淀中加入500μL试剂C重悬沉淀，充分混匀。
  
• 用匀浆器/匀浆机充分匀浆。
  注：
  ● 一般用Dounce匀浆器的匀浆30～40次。
  ● 每上下一个来回为一次。
  
• 将匀浆液置4℃震荡20～30分钟。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有低温震荡条件可以不震荡，在2～8℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
  
• 将匀浆液在2000×g力离心5分钟。其沉淀，收集上清。
  
• 将上清在5000×g力离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在10000×g力离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在4℃，100000×g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
  注：
  ● 如果条件允许，可将离心时间延长到2～24小时。
  ● 液体量较少没有合适转头时，可以将小离心管套入大离心管进行离心；或者用PBS补充液体量后用合适的离心管离心。
  
• 弃上清，沉淀即为核糖体。
  
• 用相应的缓冲液重悬核糖体，置冰箱备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 可不用试剂盒中的核糖体保存液重悬，根据实验选择合适缓冲液重悬核糖体或直接用于下游实验。

相关搜索：植物核糖体提取试剂盒(酶法)，Plant ribosome Extraction Kit